Dans cette vidéo, vous aurez un bref aperçu de la méthode permettant de construire un plasmide à partir d'une séquence d'ADN que vous pourrez transformer dans des cellules pour votre projet iGEM. Nous allons ici parcourir les principales techniques de biologie moléculaire utilisées en laboratoire.
Après avoir conçu sur ordinateur votre plasmide comprenant une origine de réplication et un gène de résistance à un antibiotique, il est temps de créer une molécule que vous pourrez utiliser. Pour ce faire, quatre techniques sont utilisées pour a**embler l'ADN.
1) Digestion par une enzyme de restriction ou section de l'ADN. Ce procédé permet de couper le brin d'ADN en une séquence spécifique appelée site de restriction grâce à des protéines appelées enzymes de restriction. Dans un plasmide Biobrick, on peut trouver plusieurs sites de restriction spécifiques de part et d'autre du gène d'intérêt. En utilisant les enzymes de restriction correspondant à ces sites, il est possible de couper le gène d'intérêt pour le séparer du plasmide initial.
2) Extraction de gel ou séparation des brins d'ADN. Avant de pouvoir coller les brins d'ADN dans un autre plasmide receveur, il est nécessaire de séparer le gène préalablement coupé du plasmide d'origine. Ceci est réalisé grâce à une électrophorèse sur gel. Dans cette technique, on utilise un gel d'agarose et un courant électrique pour séparer des fragments d'ADN selon leur taille.
3) Ligature ou collage des différents brins d'ADN. Après avoir extrait le brin d'ADN recherché, on peut coller les différentes parties de l'a**emblage final. On utilise pour cela une enzyme appelée ADN ligase.
4) Transformation ou insertion du plasmide dans les cellules. Après avoir ligué le gène d'intérêt dans un plasmide receveur, on peut transformer le nouveau plasmide obtenu dans des cellules. Les cellules peuvent ensuite se diviser et reproduire l'ADN introduit. On peut ainsi récupérer de nombreuses copies du plasmide créé un cultivant les cellules (avec l'antibiotique adéquat pour que seules les cellules ayant le plasmide survivent) et utiliser la technique de la miniprep pour extraire les plasmides.
En répétant ces quatre étapes, vous pouvez construire votre a**emblage à partir de gènes présents dans le catalogue d'iGEM ou issus de vos propres créations. Maintenant que vous avez une idée des outils nécessaires à la réalisation d'un projet en biologie synthétique, vous pouvez penser à créer une équipe iGEM !